单细胞藻类在贝类育苗中是目前不可替代的开口饵料和主要培养用饵。在单细胞藻类(以下简称单胞藻)培养中,消毒贯穿单胞藻培养的始终,是培养工作中非常重要的环节,关系到培养工作的成败。本人根据大量培养单胞藻的接种顺序(目前大量培养单胞藻顺序是三角瓶----矿泉水桶----大白桶----水泥池),对培养中消毒工作分述如下:
一、一级培养消毒
一级培养消毒指保种室的培养消毒,主要分为水处理和消毒、营养盐的消毒、工具、用具消毒、操作和容器消毒。
1、水处理和消毒:如果用砂滤海水(经二级砂滤),再经脱脂棉过滤,保持沸腾5分钟,趁热用双层打印纸封口并用橡皮筋扎紧,经冷却后即可使用;如果用冷开海水,经脱脂棉过滤、煮沸2-3分钟,其余同砂滤海水消毒。
2、营养盐的消毒,指一级培养所用营养盐的配制和使用。
配制营养盐用纯净水或清洁自来水经脱脂过滤后使用,一种试剂经煮沸溶解后再溶解另一种试剂,试剂全部溶解后再根据浓度定溶,煮沸,冷却后加VB1、VB12,加VB1、VB12前手和工具用70%酒精消毒。
3、工具、用具消毒
向三角瓶加营养盐的工具、用具,如刻度吸管、50ml、500ml烧杯都要经煮沸消毒10分钟左右。
4、手消毒
先用淡水洗净,干毛巾擦干,再用70%酒精棉擦拭消毒。
5、日常管理中的消毒
在日常管理中,每天摇瓶、移瓶、观察瓶内沉淀物时手一定要消毒。在操作摇瓶时,藻液不小心溅出,一定要用70%酒精棉擦拭溅出藻液。原则上摇完一个品种再摇另一个品种前手也要消毒。
6、容器消毒
一级培养中所用的容器是三角烧瓶,其消毒可在要消毒的三角瓶中加少量淡水,或经脱脂棉过滤的砂滤海水,再将其煮沸5分钟,用双层打印纸封口,待自然冷却后倒掉水即可使用。
二、二级培养消毒
二级培养所用容器是矿泉水桶和40-50L的大白桶。矿泉水桶培养是介于一级培养和二级培养之间的一种培养方式,以前是用悬挂塑料袋一次性培养,因其培养成本大,操作麻烦而被目前的矿泉水桶培养取代。理论上讲,矿泉水桶培养仍属于二级培养。
1、矿泉水桶消毒
目前在单胞藻培养中所使用的矿泉水桶有两种:一种不耐高温,另一种耐高温,沸腾的海水可直接装入,因此消毒方法也不一样。
(1)不耐高温矿泉水桶消毒
矿泉水桶先用砂滤海水洗净,再用1:1工业用盐酸消毒10-15分钟,然后用消毒海水(冷开海水)冲洗两遍(工具、手均要消毒),最后加冷开海水、营养盐、藻种、消毒好的充气软管、气石(经淡水煮沸消毒10分钟),用消毒好的方便袋封口,充气培养。
(2)耐高温矿泉水桶消毒
这种矿泉水桶直接用砂滤海水洗净,如果不能洗净可再用工业盐酸洗净桶内污物,用少量开水海水冲洗两遍,再装入热开海水,用塑料袋封口,冷却后待用。其余操作同不耐高温矿泉水桶消毒。
2、大白桶消毒
大白桶培养单胞藻因海水消毒方式不同,分为冷开水培养和消毒水培养。
(1)冷开水培养消毒
大白桶经砂滤海水洗净,再用开水海水冲洗两遍,直接装入热海水,桶盖用热海水冲洗消毒后封口。冷却后再加营养盐、藻种、消毒后的软管、气石、塑料薄膜(经淡水煮沸消毒10分钟),最后用橡皮筋扎紧桶口的塑料薄膜。
(2)消毒水培养消毒
大白桶经砂滤海水洗净,直接装入砂滤海水(200目网过滤),然后每桶加两片消毒片(上海产,每片含三氯异氰尿酸500mg),待消毒片完全溶解后,再用桶内消毒水冲洗内壁、桶口和桶盖内侧,12小时后用10%硫代硫酸钠溶液(煮沸溶解)30ml/桶充气(软管气石消毒同矿泉水桶)中和10-20分钟即可接种培养。
三、三级培养消毒
三级培养指用水泥池敞口培养单胞藻。
旧的水泥池在未用前不能洗净,可用工业用盐酸浸淋洗刷,再用砂滤海水洗净,培养过单胞藻的水泥池洗刷,如果是海水原池消毒,可直接用砂滤海水洗刷池壁和气石软管。加入砂滤海水,再用60目网过滤漂白粉,早期(3-5月)和后期(10-11月)培养均按50-60mg/L加入漂白粉(含有效氯28-30%),充气搅拌5-10分钟,再用池内消毒水淋遍池内壁和池口边内侧,消毒12小时后按所用的漂白粉量40-50%硫代硫酸钠充气中和15-20分钟即可加营养盐接种培养。中期(7-9月)培养时按80-100mg/L加入漂白粉消毒海水。
如果藻类需求量大,原池消毒来不及,可提前将海水在消毒池中消毒好(80-100mg/L漂白粉消毒6-12小时),水泥池用砂滤海水洗净,再用漂白粉按1kg /20m2池消毒20-30分钟。用消毒海水冲洗池底,按消毒水中加漂白粉量的40-50%硫代硫酸钠充气中和15-20分钟即可接种。
(信息来源:滨海县海洋与渔业局)